Nile blue
Nile blue, Nile blue A eller Nilblå er et fluorescerende farvestof, der bruges meget til farvning af snit til mikroskopi i biologi og histologi, da det kan bruges både til levende og fixerede celler for at give en blå farve til cellekernen. Farvestoffet bruges også til fluorescensmikroskopi, da det fluorescerer stærkt og reagerer med polyhydroxybutyrate-granula i prokaryote såvel som eukaryote celler.
Ved kogning af Nile blue med svovlsyre produceres Nile red (også kaldet Nile blue oxazone) der også har en stærk fluorescens.
Koncentrationer (fra venstre): 1000 ppm, 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm, 0,1 ppm.
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14.
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
Fra venstre: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14
Left to right: 1. methanol, 2. ethanol, 3. methyl-tert-butylether, 4. cyclohexan, 5. n-hexan, 6. acetone, 7. tetrahydrofuran, 8. ethylacetat, 9. dimethylformamid, 10. acetonitril, 11. toluen, 12. chloroform
Kemiske og fysiske egenskaber
Nile blue er et fluorescerende farvestof. Fluorescensen viser sig særlig i upolære opløsningsmidler.[1] Absorptionsmaxima af den absorberede elektromagnetiske stråling og emissionsmaxima af de emiterede synlige lys er stærkt afhængig af både pH og det anvendte opløsningsmiddel:[1]
| Opløsnings- middel | Absorptions- maksimum λ (nm) | Emissions- maksimum λ (nm) |
|---|---|---|
| Toluen | 493 | 574 |
| Acetone | 499 | 596 |
| Dimethylformamid | 504 | 598 |
| Chloroform | 624 | 647 |
| 1-Butanol | 627 | 664 |
| 2-Propanol (Isopropanol) | 627 | 665 |
| Ethanol | 628 | 667 |
| Methanol | 626 | 668 |
| Vand | 635 | 674 |
| Saltsyre (1.0 N, pH = 1.0) | 457 | 556 |
| Natriumhydroxid (0,1 N, pH = 11.0) | 522 | 668 |
| Ammoniakvand (pH = 13.0) | 524 | 668 |
Varigheden af fluorescensen i ethanol er blevet bestemt til 1.42 ns (nanosekund), hvilket er kortere end den tilsvarende værdi for Nile red på 3.65 ns. Varigheden er uafhængig af fortyndingsgraden i området 10−3–10−8 mol/L.[1]
Biologisk forskning
Mikroskopi med Nile blue
Nile blue bruges til differentiel farvning af celler, da det farver neutrale lipider (triglycerider, cholesterolestere og steroider) pink og syrer (DNA, fedtsyrer, chromolipider og phospholipider) blå.[2][3]
DNA-electrophorese
Nile blue bruges også som farvning af DNA i DNA-elektroforese.[4]
Farvning af celler
Se også
- Fluorofor
- Lysstof eller fosfor (med tryk på sidste stavelse)
Eksterne henvisninger og referencer
- ^ a b c Jose, Jiney; Burgess, Kevin (2006). "Benzophenoxazine-based fluorescent dyes for labeling biomolecules" (PDF). Tetrahedron. 62 (48): 11021. doi:10.1016/j.tet.2006.08.056.
- ^ Roche Lexikon, accessed 25 June 2007 Arkiveret 26. september 2007 hos Wayback Machine.
- ^ 97/647/EG: Entscheidung der EU-Kommission vom 9. September 1997 über ein vorläufiges Versuchsprogramm für Diagnose, Nachweis und Identifizierung von Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith in Kartoffeln, accessed 27 June 2007.
- ^ "PDF DNA staining protocol for schools, University of Reading" (PDF). Arkiveret fra originalen (PDF) 4. marts 2012. Hentet 6. februar 2014.
Medier brugt på denne side
Forfatter/Opretter: Kuebi = Armin Kübelbeck, Licens: CC BY-SA 3.0
Nile blue (free base) at daylight (top row) and UV-light (second row) in different solvents. From left to right: 1. Methanol, 2. Ethanol, 3. Methyl-tert-Butylether, 4. Cyclohexane, 5. n-Hexane, 6. Acetone, 7. Tetrahydrofuran, 8. Ethylacetate, 9. Dimethylformamide, 10. Acetonitrile, 11. Toluene, 12. Chloroform
Forfatter/Opretter: Kuebi = Armin Kübelbeck, Licens: CC BY-SA 3.0
Nile blue at UV-light (366 nm) and different pH-values. From left to right: pH=0, pH=4, pH=7, pH=10, pH=14. The lower phase is aqueous, the upper one ethyl acetate.
Forfatter/Opretter: Kuebi = Armin Kübelbeck, Licens: CC BY-SA 3.0
Nile blue at daylight and different pH-values. From left to right: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14. The lower phase is aqueous, the upper one ethyl acetate.
Forfatter/Opretter: Kuebi = Armin Kübelbeck, Licens: CC BY-SA 3.0
Nile blue hydro chloride in water at daylight and different pH-values. From left to right: pH 0, pH 4, pH 7, pH 10, pH 14.
Ball-and-stick model of Nile blue
Forfatter/Opretter: Kuebi = Armin Kübelbeck, Licens: CC BY-SA 3.0
Nile blue hydrochloride at daylight in different concentrations in water. From left to right:0,1 % (1000 ppm), 0,01% (100ppm), 0,001% (10 ppm), 0,000 1% (1 ppm), 0,000 01% (100 ppb).